IMUNO-HISTOQUIMICA - TÉCNICA - DB Molecular

IMUNO-HISTOQUIMICA - TÉCNICA

A imuno-histoquímica é um método de diagnóstico complementar à histopatologia, que utiliza o princípio antígeno-anticorpo para determinar a expressão de
biomarcadores específicos em diferentes tipos de células e tecidos. Possibilita uma análise semiquantitativa de proteínas-alvo permitindo avaliar sua expressão, sua distribuição e sua localização.

 

Técnica

 

A técnica de imuno-histoquímica é necessariamente realizada após uma análise histopatológica de biopsia, por isso, o material já deve estar em parafina para ser submetido a novos cortes, os quais são fixados em lâmina.

 

A fixação do tecido em formalina forma pontes de metileno entre os aminoácidos das proteínas tissulares e os adjacentes. Estas múltiplas ligações bloqueiam o acesso de anticorpos aos epítopos alvo, mascarando o antígeno. Por isso, antes de serem realizadas as reações de imuno-histoquímica, a amostra passa pelo processo de recuperação antigênica, no qual as pontes de metileno são quebradas e as proteínas são expostas.

 

Na lâmina com o tecido fixado, são adicionados anticorpos específicos marcados com enzimas. Para amplificar o sinal, são utilizados anticorpos secundários com marcadores enzimáticos ligados a anticorpos primários.

 

IMUNO-HISTOQUIMICA - TÉCNICA

 

 

Quando as proteínas de interesse estão presentes no tecido, o complexo de anticorpos marcados liga-se a elas, indicando uma reação positiva.


Para que a reação seja visualizada à microscopia óptica, o material é submetido a coloração, e de acordo com a intensidade, o patologista gradua a reação de imuno-histoquímica associando à morfologia do tecido.

 

 

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Qualidade


No controle de qualidade, devem ser avaliados tanto os reagentes como a viabilidade e a fixação da amostra de tecido.


Para garantir a interpretação correta dos casos, é necessária a realização de controles positivos. A forma mais utilizada é o uso de amostras teciduais com expressão previamente conhecida para o marcador utilizado.

Da mesma forma, controles negativos são utilizados avaliando a especificidade do anticorpo, no qual se espera que não haja reações cruzadas.

 

O DB Patologia utiliza apenas anticorpos padronizados e validados em plataformas automatizadas.

Todos esses processos seguem uma validação interna rígida e controle de qualidade, conforme preconizado pelo Colegio Americano de Patologistas (CAP)

 

Aplicações

 

A técnica de imuno-histoquímica é muito importante na elucidação diagnóstica de neoplasias e outras doenças e no direcionamento a tratamentos. Suas principais aplicações, são:

 

- Confirmação diagnóstica
- Classificação de tumores
- Subtipagem de linfomas e leucemias
- Diagnóstico de doenças infecciosas
- Avaliação de mutações específicas
- Diferenciação diagnóstica em neoplasias indiferenciadas
- Predição de resposta terapêutica
- Determinação de micrometástases
- Determinação de sítio primário em neoplasias de origem desconhecida
- Prognóstico de doenças
- Pesquisa de infertilidade

 

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Nossos serviços

 

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Referências


EXPEDEON . Immunohistochemistry Principles, uses and methods. Disponível em: https://www.expedeon.com/immunohistochemistry-principles-uses-and-methods-2/.
FERRO, AB. Imunohistoquímica. [livro online]. Lisboa: 2013. https://repositorio.ipl.pt/bitstream/10400.21/4569/1/Imunohistoqu%C3%ADmica.pdf.
NOVUS BIOLOGICAS. Immunohistochemistry (IHC) Handbook. Disponível em: http://images.novusbio.com/design/BR_IHCGuide_011017_web.pdf.
TAYLOR, CR; RUDBECK, L. . Immunohistochemical Staining Methods. Sixth Edition. Dako.
https://www.agilent.com/cs/library/technicaloverviews/public/08002_ihc_staining_methods.pdf.

 

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